|
|
Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu
Benešová, Lenka
Látky steroidní povahy jsou nedílnou součástí všech organismů. Patří mezi ně například žlučové kyseliny, steroidní hormony nebo některé vitaminy. Cholesterol je lipofilní složkou buněčných membrán. Jeho ukládání do cév v podobě nízkodenzitního lipoproteinu (LDL) má za následek závažné zdravotní komplikace jako je ateroskleróza a další. 7-dehydrocholesterol je prekurzorem cholesterolu a dalšího steroidu studovaného v této práci, cholekalciferolu (vitamin D3). Zvýšené množství 7-dehydrocholesterolu v důsledku deficitu 7-dehydrocholesterol reduktázy je příčinou rozvoje Smith- Lemli-Opitzova syndromu (SLOS), autosomálně recesivního genetického onemocnění vedoucího k různým stupňům mentální a fyzické retardace. Elektroanalytické metody se k detekci steroidních sloučenin využívají okrajově, jelikož redoxní aktivita řady steroidů, které neobsahují žádné nebo pouze izolované dvojné vazby na steroidním skeletu, je omezená. V rámci této disertační práce byly vyvíjeny voltametrické metody a metody založené na průtokové injekční analýze s multipulsní amperometrickou detekcí a amperometrickou detekcí při konstantním potenciálu pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu. Měření byla prováděna na pracovních diskových elektrodách, a to borem dopované diamantové elektrodě, elektrodě ze...
|
|
|
Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu
Benešová, Lenka ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Navrátil, Tomáš (oponent) ; Šelešovská, Renáta (oponent)
Látky steroidní povahy jsou nedílnou součástí všech organismů. Patří mezi ně například žlučové kyseliny, steroidní hormony nebo některé vitaminy. Cholesterol je lipofilní složkou buněčných membrán. Jeho ukládání do cév v podobě nízkodenzitního lipoproteinu (LDL) má za následek závažné zdravotní komplikace jako je ateroskleróza a další. 7-dehydrocholesterol je prekurzorem cholesterolu a dalšího steroidu studovaného v této práci, cholekalciferolu (vitamin D3). Zvýšené množství 7-dehydrocholesterolu v důsledku deficitu 7-dehydrocholesterol reduktázy je příčinou rozvoje Smith- Lemli-Opitzova syndromu (SLOS), autosomálně recesivního genetického onemocnění vedoucího k různým stupňům mentální a fyzické retardace. Elektroanalytické metody se k detekci steroidních sloučenin využívají okrajově, jelikož redoxní aktivita řady steroidů, které neobsahují žádné nebo pouze izolované dvojné vazby na steroidním skeletu, je omezená. V rámci této disertační práce byly vyvíjeny voltametrické metody a metody založené na průtokové injekční analýze s multipulsní amperometrickou detekcí a amperometrickou detekcí při konstantním potenciálu pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu. Měření byla prováděna na pracovních diskových elektrodách, a to borem dopované diamantové elektrodě, elektrodě ze...
|
|
|
Stanovení cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu metodou HPLC se spektrofotometrickou a elektrochemickou detekcí
Dostálková, Lucie ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Vyskočil, Vlastimil (oponent)
Obsahem této práce je ověření možnosti současného stanovení tří strukturně příbuzných biologicky aktivních látek (cholesterol, 7-dehydrocholesterol a cholekalciferol) po předchozí separaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a následné elektrochemické (na borem dopované diamantové elektrodě) a spektrofotometrické detekci, které byly v práci porovnávány. Byl zkoumán vliv obsahu vody v mobilní fázi (v rozsahu 0-10 %) na retenční faktor analytů a jejich odezvu pro oba typy detektorů. Při všech zkoumaných obsazích vody byly analyty separovány až na základní linii. Při zvyšujícím se obsahu vody se zvyšoval retenční faktor analytů a také proud pozadí pro vyšší kladné detekční potenciály. Na základě zaznamenaných hydrodynamických voltamogramů byl určen optimální detekční potenciál + 1,8 V. Optimální vlnová délka pro spektrofotometrickou detekci byla 200 nm. Koncentrační závislost byla naměřena v prostředí 50 mmol l−1 chloristanu sodného v acetonitrilu ve směsi s vodou (95:5, v/v). Nižší hodnoty limitů detekce poskytoval spektrofotometrický detektor oproti elektrochemickému, který měl limit detekce cholesterolu 2,3 μmol l−1 , 7-dehydrocholesterolu 1,4 μmol l−1 a cholekalciferolu 0,6 μmol l−1 . Po extrakci analytů z modelového roztoku umělého séra a vzorku plodové vody bylo zjištěno, že při...
|
|
|
Biofyzikální studium malých RNA
Šmerková, Kristýna
Prokázání souvislosti aberantního výskytu malých RNA u některých typů onemocnění a následné potvrzení jejich potenciálu při diagnostice a léčbě vedlo k hledání nových metod a materiálů, které usnadní jejich detekci a cílený transport při genové terapii. V této práci jsou sumarizovány současné poznatky o vybraných skupinách malých RNA, o jejich významu v lékařství a možnostech jejich detekce. Práce se primárně zaměřuje na kombinaci magnetické separace s elektrochemickou detekcí. Při izolaci byly využity magnetické částice (MPs) s různými povrchovými modifikacemi. Pro nespecifickou separaci nukleových kyselin sloužily silanolové MPs, pro specifickou separaci byly použity MPs se streptavidinem na povrchu, které byly modifikovány specifickou biotinylovanou sondou. Pro citlivou elektrochemickou detekci byla využita square wave voltametrie (SWV). Optimalizovaná metoda založená na specifické magnetické separaci spojená se SWV dosáhla u microRNA nanomolárního limitu detekce (4 nM) a byla aplikována na vzorky lidských embryonálních buněk pro separaci a detekci miR-124. CdTe kvantové tečky (QDs) byly studovány jako nanotechnologický nástroj pro detekci krátkých nukleových kyselin. Povrch QDs byl modifikován streptavidinem, který zajišťoval biokonjugaci s biotinylovanými molekulami. Interakce QDs s nukleovými kyselinami byla studována pomocí kapilární elektroforézy
|
|
|
Moderní analytické metody pro detekci aminokyselin asociovaných se zhoubnými nádory prostaty
Cernei, Natalia
V předkládané disertační práci s názvem "Moderní analytické metody pro detekci aminokyselin asociovaných se zhoubnými nádory prostaty" byl studován sarkosin jako potencionální nádorový marker který má význam pro diagnostiku agresivních forem karcinomu prostaty. Dále byl studován vliv přídavků sarkosinu k prostatické buněčné linii PC3. Další studovanou oblastí byly interakce sarkosinu s aminokyselinami, chloridem sodným, kyselinou močovou a uracilem. Primárně jsme se také zaměřili na vývoj metody pro detekci sarkosinu ve vzorcích moči pacientů s Cap a prostatických buňkách.
|
|
|
Stanovení vybraných terpenoidů pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí
Mužíková, Jana ; Dejmková, Hana (vedoucí práce) ; Schwarzová, Karolina (oponent)
Tato práce se zabývá stanovením karvakrolu, thymolu a eugenolu pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí. Jako pracovní elektrody byly použity uhlíková pastová elektroda a borem dopovaná diamantová filmová elektroda. Pro srovnání byla ještě vedle elektrochemické detekce použita UV spektrofotometrická detekce při vlnové délce 275 nm. K separaci byla použita kolona LiChroCART 125-4, RP-18e (5µm). Byly určeny optimální podmínky separace: mobilní fáze složená z acetonitrilu a acetátového pufru v poměru 50:50, optimální pH pufru bylo 5. Jako optimální potenciál pracovní elektrody byl zvolen potenciál +0,8 V v případě uhlíkové pastové elektrody a +1,2 V v případě borem dopované diamantové elektrody. U obou elektrod byla ověřena opakovatelnost měření, povrch obou elektrod bylo nutné během měření obnovovat. Za optimálních podmínek byly proměřeny kalibrační závislosti, ze kterých byly zjištěny meze stanovitelnosti. Studované látky byly vyvinutými metodami stanoveny v reálných vzorcích, a to v mateřídoušce obecné a řebříčku obecném, dále pak v průduškovém čaji a v sirupu s mateřídouškou.
|
|
|
Stanovení karvakrolu pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí
Mužíková, Jana ; Dejmková, Hana (vedoucí práce) ; Schwarzová, Karolina (oponent)
Tato práce se zabývá stanovením karvakrolu ve směsi s eugenolem a thymolem pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí. Jako pracovní elektroda byla použita uhlíková pastová elektroda. K separaci byly použita kolona Kromasil-C18, 250x4,6 mm. Pro srovnání byla ještě vedle elektrochemické detekce použita UV spektrofotometrická detekce při vlnové délce 275 nm. Byly stanoveny optimální podmínky separace: mobilní fáze složená z acetonitrilu a fosforečnanového pufru v poměru 60:40, optimální pH pufru bylo pH 4. Jako optimální potenciál pracovní elektrody při elektrochemické detekci byl nalezen potenciál +1,1 V. Na základě získaných informací byly proměřeny kalibrační závislosti, ze kterých byly zjištěny meze stanovitelnosti. Mez stanovitelnosti pro karvakrol byla 9,6·10-7 mol dm-3 při použití UV spektrofotometrické detekce a 4,0·10-8 mol dm-3 při použití elektrochemické detekce.
|
|
|
Studium redoxních reakcí a adsorpce 4-nitrofenyltriazolem značených nukleosidů a kresolů na borem dopovaných diamantových elektrodách pro vývoj elektroanalytických metod
Vosáhlová, Jana ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Havran, Luděk (oponent) ; Navrátil, Tomáš (oponent)
V této práci byly testovány borem dopované diamantové elektrody s různou úpravou povrchu pro vybrané oxidovatelné a redukovatelné modelové látky, konkrétně p- a o- izomery kresolu a 2'-deoxycytidin a 7-deazaadenosin značené 4-nitrofenyltriazolem (dCTRNO2 a dATRNO2 ). Cílem bylo studium elektrochemických a adsorpčních dějů s následným vývojem voltametrických metod detekce studovaných látek, popřípadě použití borem dopované elektrody jako pracovní elektrody v průtokových systémech. Kresoly byly použity jako modelové oxidovatelné analyty. Na O-terminované a leštěné BDD elektrodě poskytují oxidační signál díky oxidaci na methylfenoxyradikál. Bylo dosaženo porovnatelných hodnot oxidačního potenciálu jako na ostatních studovaných uhlíkových elektrodách, tj. elektrodě ze skelného uhlíku, elektrodě z pyrolytického grafitu a uhlíkové pastové elektrodě. Tyto elektrodové materiály vykazují relativně vysokou náchylnost k adsorpci reakčních produktů, přičemž na borem dopovaném diamantu je jejich adsorpce minimální. In situ anodická aktivace umožňuje rychlou regeneraci povrchu borem dopovaného diamantu před každým skenem. Vyvinutá diferenční pulsní voltametrická metoda s detekčním limitem v rozsahu 0,61 mol∙l−1 až 2,97 mol∙l−1 , která byla testována na modelových vzorcích říční vody, tak představuje rychlou a...
|
|
|
Štúdium možností elektrochemickej detekcie špecifických sekvencií nukleových kyselín
Vaňová, Veronika
Tato práce se zabývá studiem možností vytvoření elektrochemického biosenzoru pro detekci specifických sekvencí nukleových kyselin. Teoretická část se věnuje popisu různých typů RNA, se speciálním zaměřením na miRNA a možnostmi její detekce. Rovněž popisuje různé elektrochemické přístupy detekce, jednak nukleových kyselin a také konkrétnější miRNA. miRNA je potenciální biomarker, který by se dal využít pro včasnou a neinvazivní diagnostiku onkologických onemocnění. Experimentální část je zaměřena na navržení, optimalizaci a přípravu citlivého biosenzory pro detekci miRNA-21. Byl připraven biosenzor pro detekci co nejnižší koncentrace miRNA-21 ve vzorku. Byl změřen lineární rozsah koncentraci pro kalibrační křivku od 1 nM až po 1 fM koncentraci. Měřením jsme dosáhli LOD 1 fM a výpočtem z regresní rovnice až 3,2 zM a LOQ byl 10,8 zM. Následně byly měřeny vzorky v artificiálni moči, jako ověření fungování senzoru v reálných podmínkách. Výsledky ukázaly minimální vliv matrice na stanovení cílové miRNA.
|
|
|
Vývoj elektrochemických metod využívajících nanotechnologie pro environmentální mobilní detekční systémy
Kudr, Jiří
Znečišťování životního prostředí v 21. století znepokojujícím způsobem akcelerovalo. Kontinuální monitoring hladiny polutantů je nutnou součástí efektivní ochrany životního prostředí. Pro tyto účely vznikla potřeba analyzovat velká množství vzorků v krátkém čase. Odpovědí na tuto potřebu byl průnik automatizace do analytické chemie. Velkou popularitu si získaly především na průtoku založené techniky, které výrazně snižují potřebu manuální manipulace se vzorky a tím snižují i časovou náročnost analýz. Fluidní zařízení umožnují implementaci řady detektorů. Elektrochemické detektory se díky vysoké citlivosti, dostatečné selektivitě a schopnosti miniaturizace staly oblíbenou součástí fluidních a automatizovaných zařízení. Předložená práce se primárně zabývá metodami detekce kontaminace těžkými kovy a bakteriemi. Za tímto účelem byly vytvářeny elektrochemické automatizované systémy a metody využívající nanotechnologie.
|
host ::
RSS.